Bawo ni awọn endonucelease duro jade
Elo ni o mọ nipa idinamọ awọn ensaemusi? Gba oye ti o dara julọ nipa ohun ti wọn ṣe ati idi ti wọn ṣe pataki, pẹlu atunyẹwo yii.
Sọkọye Awọn ihamọ-ailopin Enzymes
Awọn endonucleases ti ihamọ jẹ ẹya-ara ti henensiamu ti o ge awọn ohun elo DNA. Olukuluku enikanmu mọ ọna pataki ti nucleotides ninu okun DNA. Awọn abawọn bẹẹ jẹ nigbagbogbo nipa 4 si 6 awọn alailẹgbẹ-pipẹ gun. Awọn abajade jẹ palindromic ni pe ọna asopọ DNA ti o ni ibamu ni ọna kanna nikan ni itọsọna iyipada.
Ni awọn ọrọ miiran, a ti ge okun mejeji DNA ni ipo kanna.
Nibo ti a ti rii awọn Enzymu wọnyi
Awọn enzymu ihamọ ni a rii ni ọpọlọpọ awọn okunfa ti awọn kokoro arun nibiti ibi ipa-ara wọn jẹ lati kopa ninu idaabobo alagbeka. Awọn enzymu wọnyi "ni ihamọ" DNA ti o wa ni ajeji (fun apẹẹrẹ ogun) ti o wọ inu sẹẹli naa, nipa pa a run. Foonu ile-iṣọ ni eto ti o ni idinku-iyipada ti o ṣe amuṣeduro DNA ti ara rẹ ni awọn aaye kan pato fun awọn enzymu ihamọ ti o ni ihamọ, nitorina dabobo rẹ kuro ni fifọ. Die e sii ju awọn enzymu ti a mọ ni ọgọrun 800 ti a ti se awari pe o da awọn oriṣiriṣi nucleotide diẹ sii ju 100 lọ.
Lo ninu imọ-ẹrọ imọ-ẹrọ
Awọn ọna itanna to ni ihamọ ni a lo ninu imọ-ẹrọ imọ-ẹrọ lati ge DNA sinu awọn iyọ kekere lati ṣe iwadi awọn iyatọ gigun kukuru laarin awọn ẹni kọọkan (Ihamọ Fragment Length Polymorphism - RFLP). Wọn tun lo fun iṣọnṣipọ pupọ.
Awọn imuposi RFLP ti lo lati mọ pe awọn eniyan tabi awọn ẹgbẹ ti awọn eniyan kọọkan ni awọn iyato ti o yatọ ni awọn abawọn ati awọn ilana idinku si ihamọ ni awọn agbegbe ti iṣan.
Imọ ti awọn agbegbe ọtọtọ yii jẹ ipilẹ fun titẹ ọwọ DNA . Ọkọọkan awọn ọna wọnyi da lori lilo ti electrophoresis gel agarose fun iyatọ awọn ajẹkù DNA. Tabọ TBE, eyiti o jẹ ti Tris base, acid boric, ati EDTA, ni a nlo fun erofẹfẹfẹ gel agarose lati wo awọn ọja DNA.
Awọn oriṣiriṣi awọn ihamọ Enzymes
Awọn oriṣiriṣi oriṣiriṣi oriṣiriṣi awọn oriṣiriṣi awọn idinada. Iru Mo ti gige DNA ni awọn ipo aiyipada titi o fi di ẹgbẹ 1000 tabi diẹ ẹ sii lati awọn aaye-ẹri idanimọ naa. Iru awọn gige III ni iwọn 25 awọn ipilẹ-ori lati aaye. Awọn oriṣiriṣi I ati III beere ATP ati pe o le jẹ awọn ensaemusi nla pẹlu ọpọ awọn ipin-ipin. Awọn enzymu ti o tẹ II, eyi ti o ni aṣeyọri ti a lo ninu imọ-ẹrọ, imọ DNA laarin ọna ti a ṣe akiyesi laisi iwulo ATP ati pe o kere julọ ati rọrun.
Awọn enzymu imukuro II ti ihamọ ni a daruko ni ibamu si awọn eya kokoro ti wọn ti ya sọtọ. Fun apẹẹrẹ, ẹri EcoRI ti ya sọtọ lati E. coli . Ọpọlọpọ awọn eniyan ni o mọ pẹlu awọn ibọn ti E. coli ni ounjẹ.
Awọn itanna eletisi II ti II ṣe le mu awọn oriṣiriṣi oriṣiriṣi oriṣiriṣi oriṣiriṣi meji ti o da lori boya wọn ge awọn iyọ mejeeji ni aarin ti a ṣe akiyesi ọkọọkan tabi aaye kọọkan sunmọ si opin kan ti ọna kikọ silẹ.
Ṣiṣẹ ti tẹlẹ yoo mu "awọn ipari" ti o kuju pẹlu ko si nucleotide overhangs. Awọn ikẹhin nfa "alailẹgbẹ" tabi "cohesive" dopin nitori pe oṣuwọn ipilẹ ti DNA ni o ni iyipo ti o n ṣe iyọrẹ awọn egungun miiran. Mejeeji wulo ninu awọn jiini ti awọn molikali fun ṣiṣe DNA recombinant ati awọn ọlọjẹ.
Iru fọọmu DNA yi wa jade nitoripe o ti ṣe nipasẹ sisọ (mimu pọpo) ti awọn oriṣiriṣi oriṣiriṣi meji tabi diẹ ẹ sii ti a ko ti sopọ mọ ni akọkọ.