Igbẹni igbasilẹ jẹ iṣiṣe awọn adakọ, tabi awọn ibeji, ti ẹyọkan kan. Lọgan ti a ba mọ agbe kan, awọn ere ibeji le ṣee lo ni ọpọlọpọ awọn agbegbe ti imọ-ẹrọ ati imọ-ẹrọ. Imọ-ṣiṣe ti iṣan-ara jẹ ilana ti iṣanṣan awọn Jiini sinu awọn eegan titun tabi yiyan ọna DNA lati yi ọja amuaradagba pada. Imọ-iṣe-iṣe ti iṣan-lori da lori agbara wa lati ṣe awọn ilana pataki to ṣe pataki.
01 Aṣeyọri Ikọṣọrọ Pọnsiamu
02 Awọn ijẹmọ Enikeni
Iwari ti awọn enzymu ti a mọ si awọn endonucleases ihamọ jẹ pataki fun imọ-ẹrọ amuaradagba . Awọn enzymu wọnyi ge DNA ni awọn ipo kan pato ti o da lori ọna kikọ nucleotide. Awọn ọgọrun-un ti awọn enzymu idinku awọn ihamọ ti o yatọ, ti o lagbara lati gige DNA ni aaye kan pato, ti ya kuro lati inu awọn orisirisi kokoro-arun. DNA ti a ge pẹlu imudaniloju enzymu nmu ọpọlọpọ awọn ajẹkù, ti o yatọ si titobi. Awọn wọnyi ni a le pinya nipa lilo electrophoresis gel tabi chromatography.
03 Ẹrọ-akọọlẹ
Ṣiṣawari DNA lati inu iṣẹ iṣelọpọ, tabi gige ti o nlo awọn idibajẹ ihamọ kii yoo ni lilo pupọ bi a ko ba le wo oju DNA - eyini ni, wa ọna lati wo boya tabi ipinnu rẹ ni ohunkohun, tabi awọn egungun iwọn rẹ 'o ge o sinu. Ọkan ọna lati ṣe eyi ni nipasẹ gbigbọn gel electrophoresis. A lo awọn ti a lo fun awọn oriṣiriṣi idi, lati wiwo DNA ti a ka si wiwa awọn ifibọ DNA ati knockouts.
04 Darapọ mọ DNA meji
Ni imọ-jiini, o jẹ dandan lati ṣe asopọ asopọ meji tabi diẹ ẹ sii ti DNA, lati ṣẹda okun ti o pada, tabi pa ipin lẹta ti a ti ge pẹlu awọn idinku awọn ihamọ. Awọn Enzymes ti a npe ni lika DNA le ṣẹda awọn ifunmọ laarin awọn ẹwọn nucleotide. Awọn enzymu DNA polymerase I ati polynucleotide kinase tun ṣe pataki ninu ilana yii, fun kikun awọn ela tabi phosphorylating awọn ipari 5, lẹsẹsẹ.
05 Aṣayan ti DNA ti ara ẹni atunṣe ara ẹni
Awọn ọna ipin lẹta kekere ti DNA ti ko jẹ apakan ti ipilẹ aisan ti ko ni kokoro, ṣugbọn o lagbara lati ṣe atunṣe ara ẹni, ti a mọ ni plasmids. Plasmids ni a nlo bi awọn opo-ara lati gbe awọn jiini laarin awọn microorganisms. Ni imọ-ẹrọ imọ-ẹrọ, ni kete ti o ti pọ si pupọ ti awọn ayanfẹ ati pe pupọ ati eegun ti o wa ni pipa nipasẹ awọn idinku awọn ẹdọmọmu, a ti pin wọn pọ pẹlu sisọ ohun ti a mọ ni DNA recombinant. Gbogun ti ogun (bacteriophage) DNA tun le ṣee lo bi veẹẹsẹ, bi o ṣe le jẹ awọn iṣelọpọ, awọn plasmids recombinant ti o ni awọn jiini ti bacteriophage.
06 Ọna lati Gbe Olufẹ kan si inu Cell Host
Ilana gbigbe gbigbe awọn ohun jiini lori ohun elo kan gẹgẹbi plasmid, sinu awọn ogun iṣakoso titun, ni a npe ni iyipada. Ilana yii nilo pe awọn oju-ogun ti o wa ni ile-iṣẹ ti farahan si iyipada ayika ti o mu ki wọn "ni oye" tabi fun igba diẹ fun asọ-ara. Electropo jẹ ọkan iru ilana. Ti o tobi ni ipalara, isalẹ iṣẹ ṣiṣe pẹlu eyi ti o ti mu nipasẹ awọn sẹẹli. Awọn ipele ti DNA tobi sii ti wa ni iṣelọpọ iṣọrọ nipa lilo bacteriophage, awọn ọlọjẹ tabi awọn ohun elo miiran ti o gbogun tabi awọn iṣelọpọ ni ọna ti a npe ni transduction. Alakoso tabi awọn opo-ara ti o ntan ni a ma nlo ni oogun oogun tun le jẹ ki DNA ti fi sii ni awọn ẹya ti awọn chromosomes wa nibiti a ko fẹran rẹ, nfa awọn ilolu ati paapaa akàn.
07 Awọn ọna lati Yan Awọn ohun alumọni ti o wa ni Transgenic
Ko gbogbo awọn sẹẹli yoo gba DNA lakoko iyipada. O ṣe pataki ki o wa ọna kan ti wiwa awọn ti o ṣe. Ni gbogbogbo, awọn plasmids gbe awọn jiini fun awọn itọju aporo aisan ati awọn sẹẹli transgenic le wa ni a yan ti o da lori ikosile ti awọn Jiini ati agbara wọn lati dagba lori media ti o ni awọn ogun aisan. Awọn ọna iyipo miiran ti o wa ni asayan daa duro niwaju awọn ọlọjẹ onirohin miiran bi eto x-gal / lacZ , tabi protein amuaradagba alawọ ewe, eyiti o gba asayan ti o da lori awọ ati fluorescence, lẹsẹsẹ.