Ni idagbasoke ni 1983, ilana ti PCR ti jẹ ki o ṣee ṣe lati ṣe iwadi DNA ati ki o ṣe idanimọ awọn ilana ti nucleotides ninu awọn jiini kọọkan.
Ọna naa nlo gigun kẹkẹ gbona tabi igbasẹpo ati itutu afẹfẹ ti iṣeduro fun DNS melting ati idapo. Bi PCR ti tẹsiwaju, a lo DNA "titun" gẹgẹbi awoṣe fun atunṣe ati pípẹ imularada kan, n ṣe afihan titobi DNA awoṣe.
Awọn ilana PCR ti wa ni lilo ni ọpọlọpọ awọn agbegbe ti imọ-ẹrọ imọ-ẹrọ pẹlu iṣẹ- ṣiṣe amuaradagba , iṣelọpọ, forensics (DNA fingerprinting), idanimọ ọmọ, ayẹwo ti hereditary ati / tabi awọn àkóràn, ati fun awọn ayẹwo awọn ayẹwo ayika.
Ni awọn oniwadiwadi, ni pato, PCR wulo julọ nitoripe o tun sọ paapaa iye ti o jẹ ẹri DNA julọ. PCR tun le ṣee lo lati ṣe itupalẹ DNA ti o jẹ egbegberun ọdun, ati awọn imọran wọnyi ti a lo lati ṣe idanimọ ohun gbogbo lati mammoth ti ọdun 800,000 si awọn ẹmu lati kakiri aye.
PCR ilana jẹ bi atẹle:
- Ibẹrẹ: Igbesẹ yii jẹ dandan nikan fun DNA polymerases ti o nilo PCR-tete-bẹrẹ. A mu ki a mu irun naa si laarin 94 ati 96 ° C ati ti o waye fun iṣẹju 1-9.
- Iyọdaran: Ti ilana ko ba beere fun iṣilẹkọ, itọsẹ jẹ igbesẹ akọkọ. Iwa naa ni kikan ni 94-98 ° C fun 20-30 aaya. Awọn iwe iforukọsilẹ hydrogen ti awoṣe DNA ti wa ni idilọwọ ati awọn ohun elo DNA ti o ni okun-ara ti o ṣẹda.
- Ifọwọkan: Iwọn otutu ti a ṣe ni iwọn kekere si laarin 50 ati 65 ° C ati ti o waye fun 20-40 aaya. Awọn apẹrẹ alakoko si aṣa awoṣe DNA ti o ni ara rẹ. Awọn iwọn otutu jẹ pataki julọ lakoko igbesẹ yii. Ti o ba gbona gan, alakoko le ko fi dè. Ti o ba tutu pupọ, alakoko le ṣe alailẹgbẹ. A ṣe adehun ti o dara nigbati wiwa alakoko ṣe afiṣe ibamu si ọna awoṣe.
- Ifaagun / Elongation: Awọn iwọn otutu nigba igbesẹ yii yatọ si da lori iru polymerase. DNA polymerase ti ṣe apejuwe ọna tuntun DNA tuntun.
- Elongation ipari: Igbesẹ yii ni a ṣe ni 70-74 ° C fun iṣẹju 5-15 lẹhin ikẹkọ PCR ikẹhin.
- Idaduro ipari: Igbese yii jẹ aṣayan. Awọn iwọn otutu ti wa ni pa ni 4-15 ° C ati ki o strops ni lenu.
Ilana naa pin si awọn ipele mẹta:
- Alaye pataki: Ni gbogbo igbagbogbo, ọja (ohun kan ti DNA ti o wa ni atunṣe) ti jẹ ilọpo meji.
- Igbesẹ Ipele ipele: Bi DNA polymerase ṣe padanu iṣẹ-ṣiṣe ati lilo awọn reagents, iṣesi yoo fa fifalẹ.
- Plateau: Ko si ọja diẹ ti n ṣafikun.