Eyi ni o nlo fun lilo iyatọ ti DNA
Tabọ TBE wulo julọ fun iyapa awọn egungun DNA to kere ju (MW <1000), gẹgẹbi awọn ọja kekere ti ihamọ awọn nọmba idẹrin enzymu .
TBE ni agbara agbara ti o tobi julọ ati pe yoo fun ipinnu to gaju ju fifun TAE . Tita buffer jẹ ojutu ti o wa ni ipilẹ Tris, acetic acid ati EDTA (Tris-acetate-EDTA).
TBE jẹ deede gbowolori ju TAE ati idibajẹ DNA ligase, eyi ti o le fa awọn iṣoro ti o ba ti ṣe atunṣe DNA ti o tẹle ati awọn igbesẹ iṣọn. Pẹlu awọn igbesẹ mẹta ti o tẹle, kọ bi a ṣe ṣe idaduro TBE. O yẹ ki o gba diẹ ẹ sii ju ogbon iṣẹju 30 lati ṣẹda fifẹ yii. Eyi ni bi:
Ṣe iṣeduro ipamọ iṣura ti EDTA
Ẹda EDTA (ethylenediamine tetraacetic acid) yẹ ki o ṣetan ni ọna iwaju. EDTA ko ni lọ patapata sinu ojutu titi ti a fi tun ṣe atunṣe pH si ayika 8.0. Fun fifita ọja iṣura 500-milliliter ti 0,5 M EDTA, ṣe iwọn 93.05 giramu ti iyọdi disodium EDTA (FW = 372.2). Lẹhin naa tan o ni omi omi ti a ti lẹgbẹrun 400 ati ki o ṣatunṣe pH pẹlu NaOH. Lẹhin eyi, gbe soke ojutu si iwọn didun ikẹhin ti 500 mililiters.
Ṣe iṣeduro ipamọ iṣura ti TBE
Ṣe iṣeduro ifura kan (5x) ti TBE nipa ṣe iwọn 54 g Tris base (FW = 121.14) ati 27.5 g boric acid (FW = 61.83) ati pe gbogbo wọn ni iwọn 900 milliliters ti omi ti a pin. Lẹhinna fi 20 mililiters ti 0,5 M EDTA (pH 8.0) ki o ṣatunṣe ojutu si iwọn ikẹhin ti 1 lita.
Yi ojutu le ti wa ni ipamọ ni otutu otutu ṣugbọn iṣanṣọna yoo dagba sii ni awọn iṣoro ti ogbologbo. Fipamọ ifibọ ni awọn gilasi gilasi ki o si ṣabọ ti o ba ti ṣẹgun iṣowo kan.
Ṣe iṣeduro Aṣẹ Solusan ti TBE
Fun tulufẹfẹ gbigbọn agarose, a le lo TBE buffer ni idaniloju ti 0.5x (1:10 dilution of stock concentrated). Fikun iyasọtọ ọja nipa 10x ninu omi ti a fi sinu omi. Awọn ifọkilẹ solute ni o jẹ 45 MM Tris-borate ati EDTA 1 mM. Ti o ba ti ṣafẹru jẹ ṣetan fun lilo ni ṣiṣe gel agarose .
Ohun ti O nilo
Lati ṣe abojuto TBE, iwọ yoo nilo awọn nkan mẹrin. Awọn ohun ti o ku lori akojọ yii jẹ awọn eroja. Awọn ohun elo mẹrin ti a beere fun ni iyọda EDID disodium, Tris mimọ, acid boric ati omi ti a fi sinu omi.
Fun awọn ẹrọ, iwọ yoo nilo iwọn pH ati awọn igbesẹ imurasilẹ, bi o ti yẹ. Ni afikun si eyi, iwọ yoo nilo 600-milliliter ati awọn beakers 1500-milliliter tabi awọn ikun. Ti ṣe ipinnu jade awọn ohun elo ẹrọ rẹ jẹ awọn gigun kẹkẹ ati awọn igbasilẹ paṣẹ ati fifọ awọn apẹrẹ.
Ṣayẹwo awọn iwe-itaja ti o wa ni laabu ti iwọ yoo lo lati rii daju pe o ni ohun gbogbo ti o nilo ṣaaju ki o to bẹrẹ. Ko si ohun ti o buru ju nini lati da duro ni arin igbasilẹ ojutu nitori pe o ti yọ kuro ninu awọn ohun elo to dara.
Ti ile-iwe rẹ ba wa ni ile-iwe tabi aaye iṣẹ rẹ, ṣayẹwo pẹlu eniyan to dara lati rii pe wọn ni gbogbo awọn ohun kan ninu iṣura. N ṣe bẹ le gba akoko ati agbara rẹ ni opin.